經典遺傳毒理學試驗表明普洱茶抗癌不致癌！
發布時間：2024-06-12 點擊：96
在《方舟子爆料：普洱茶致癌》一文中認為普洱茶有各種霉菌，其中必定存在對人體有害的黃曲霉。為此，小編找出刊于《普洱》雜志2012年5月刊陳文品老師的《經典遺傳毒理學試驗表明，普洱茶抗癌不致癌》一文繼續反駁，文中陳教授用詳細的科學實驗得出結論——普洱茶抗癌不致癌。
正規廠家的普洱茶產品以及經過良好貯藏的，普洱茶產品具有較高的飲用安全性，不會致癌！
普洱茶作為我國傳統食品，已有較久的安全食用歷史，目前尚沒有相關的流行病毒性調查及食用毒害事例報告，從某種意義上講，食用普洱茶的正規主導產品是安全的。然而，近幾年來，普洱茶產業多次發生因衛生事件帶來的嚴重沖擊，例如：2001年普洱茶處于高速成長期，“金門、廣州、云南全線追蹤普洱茶”一文借題大肆攻擊普洱茶不安全的不實報道，使得2002年普洱茶市場嚴重萎縮，產品積壓，價格下跌，給普洱茶產業的發展帶來了巨大的破壞，2012年有關在“變質的濕倉普洱茶”中發現黃曲霉毒素的報道被一些人斷章取義，借此大肆詆毀普洱茶，“普洱茶致癌”的謠傳在網上傳得沸沸揚揚。
1、遺傳毒理學試驗----檢測是否潛在致癌的科學方法
流言傳于無知，止于智者！人類社會的發展和科學技術的進步，飲食消費中存在著大量的安全不確定因素需要明確！現代超微量分析技術的發展推進了化學成分檢出精度的不斷提高，不少曾被認為是“無污染”食品或“清潔”食品遠非那么純凈，而許多被宣布為有毒有害的化學物質實際上在環境中和食品中都被發現以極低數量廣泛存在，可以說不存在絕對安全的食物，如何科學客觀評價現代食品的安全性已變得越來越重要。
食品安全性評價是通過風險評估進行風險控制，利用足夠的毒理學資料確定物質的安全劑量，闡明某種食品是否可以安全食用，評估食品中有關危害成分或物質的毒性極其風險大小的過程。食品安全性評價在食品安全性研究、監控和管理上具有越來越重要的意義。安全性毒理學評價也是世界貿易組織（wto）的有關協定要求和食品法典委員會（cac）的有關準則對食品衛生安全研究的重要法定方法。它是相關食品標準制定的國際通行的重要依據。
遺傳毒性指環境中化學物和物理因素對生物體遺傳物質造成的損害。突變是細胞的遺傳物質發生改變所引起的一種生物學現象，致突變試驗目的是對受試動物是否具有潛在致癌作用進行篩選。致突變原可引發的生物體體細胞遺傳物質的突變，導致各種紊亂，其中最嚴重的后果是腫瘤或癌癥的發生，或者引發生物體生殖細胞(精子、卵子及它們的前體細胞)遺傳物質的突變，導致下一代遺傳性疾病發病率的升高。
遺傳毒性試驗是指對化學物改變細胞內遺傳物質的能力進行測試，確定其致突變性及其對生物的影響，對可遺傳損傷、致癌性以及其他有關損傷進行評價的方法。
本研究采用經典的遺傳毒理學試驗方法：小鼠骨髓微核率試驗、小鼠精子畸形分析試驗，鼠傷寒沙門氏桿菌回復突變試驗、倉鼠肺成纖維細胞(chl)染色體畸變試驗，以曬青毛茶為對照，對不同貯藏年份的共5種代表性普洱茶產品進行了遺傳毒性安全性毒理學評價，以檢測其是否具有潛在的致突變和致癌毒性。
材料與方法
1.1茶葉原料
為了研究普洱茶代表性產品的安全性，本研究選取了不同廠家，不同貯藏年份和不同包裝形式的五個普洱茶樣品作為研究對象，分別編號為：a、b、c、e、f，并選取了大葉種烘青綠茶作為對照。（如表）
1.2試驗動物
體重為18－22克昆明種(km)小白鼠。
1.3實驗菌株
鼠沙門氏傷寒桿菌突變株ta97、ta98、ta100、ta102。
1.4試驗細胞株
中國倉鼠肺纖維細胞(chl)株v79。
試驗方法：茶樣常規成分分析方法
茶葉水浸出物：全量法；茶多酚總量測定：酒石酸鐵比色法；咖啡堿含量：紫外分光光度法；茶葉水分含量的測定：恒重法。
除此之外，還用了小白鼠急性毒性試驗方法、小白鼠骨髓微核試驗方法、小白鼠精子畸形試驗方法、ames試驗方法、倉鼠肺成纖維細胞(chl)染色體畸變試驗。
結果與分析：茶樣常規成分分析結果(如表)
化學分析法是食品毒理學評價的重要手段，普洱茶生化成分的分析研究已有較多的報道，本試驗選檢以上幾個項目，以對所試茶樣的情況作簡要界定。檢測結果表明所選茶樣的常規成分具有較好的代表性。
各茶樣小白鼠(km)急性毒性試驗結果
各茶樣的半致死劑量(ld50)的計算,急性毒性試驗中ld50的計算有多種方法，本試驗采用bliss法統計軟件對各茶樣的急性毒性實驗結果進行統計分析，其結果如下：
六個茶樣的急性毒性統計結果分析(如表)
急性毒性試驗是指動物一日內單次或多次(在24小時內分2～3次給藥)給藥后，在7天或14天中，連續觀察動物所產生的毒性反應及死亡情況，從定性和定量兩方面進行觀察毒性反應的方法。從毒理學角度來看，任何物質都有毒性，人或動物攝入任何物質達到一定劑量都可能致死。文獻報道[171]，大鼠口服蒸餾水ld50為469±51mlkg-1，從表6可以看出，五個普洱茶樣品的ld50分別為：9.7g/kg、11.2g/kg、12.2g/kg、11.8g/kg、12.4g/kg，烘青綠茶樣的ld50為7.5g/kg，表明普洱茶樣的急性毒性比烘青綠茶樣還低，并發現六個樣品的一次灌胃量在5g/kg體重以下時喂養觀察十四天沒有動物死亡，低于1/2ld50的灌胃劑量灌胃后多數動物表現出神經興奮癥狀；隨著灌胃劑量加大，動物在十分鐘后出現神經抑制癥狀。五個普洱茶樣的急性致死時間只有一個高峰期，而烘青綠茶則有兩個死亡高峰期，分析認為普洱茶引起動物死亡以及由烘青綠茶引起的第一死亡高峰是由過高濃度的咖啡堿所致，而烘青綠茶樣d引起第二個動物死亡高峰則可能與過高濃度的茶多酚有關；根據who1977年頒布的毒性標準，六個茶樣的ld50均大于5000mg/kg體重，可判定為實際無毒。
六個茶樣的小白鼠骨髓微核試驗結果（如表）
普洱茶遺傳毒性——微核試驗結果
微核試驗是根據分裂間期細胞內殘留染色體斷片或整個染色體組成的一種圓形或橢圓形的小體，來判斷化學物質引起染色體異常作用的一種簡便的哺乳動物體內試驗。典型的微核呈圓形，直徑相當于紅細胞直徑的1/5～1/20，染色與核質相同。微核出現是一種染色體異常現象，微核檢出率增高，可反映染色體畸變情況。由于其測定方法較簡便、快速可靠，所以已作為化學致突變試驗中常用的一種篩檢方法。
表格上可以看出：經六個茶樣灌胃處理的昆明種小白鼠，試驗結果均為陰性。表明六個茶樣都不存在致染色體斷裂的致突變性，各茶樣處理的小白鼠骨髓微核發生率均略低于空白對照，提示所試茶樣均具有一定的降低微核自然發生率的功能，即所試普洱茶樣具有一定的抗突變和抗癌的作用！有大量研究報道表明茶葉及其多酚類以及兒茶素類具有抗染色體損傷的功能，也有人研究發現綠茶可以降低某些重金屬導致的微核率的增加。
普洱茶遺傳毒性--小白鼠精子畸形檢測試驗結果
精子畸形是指精子形狀的畸形和畸形精子數量增多，畸形精子增多的原因可能是由于在精子形成過程中，致突變源使精子形成有關的基因發生突變或某些特異染色體的重排。精子畸形試驗根據受試化學物如能影響實驗動物的精子成熟過程，則可觀察到精子頭部或尾部的形態變化。
精子畸形試驗是檢驗生殖細胞染色體毒性的一種手段，a、b、c、d、e、f六個茶樣按各自得1/2ld50、1/6ld50、1/20ld50各劑量處理后，其畸形精子率與陰性對照沒有顯著性差異，而陽性對照則比陰性對照有顯著性增加，因此判定六個茶樣各劑量的畸形精子檢測結果為陰性，四茶樣所試劑量對生殖細胞沒有致畸變作用。
ames試驗結果
鼠傷寒沙門氏菌營養缺陷型回復突變試驗通常簡稱ames試驗，它是1975年由ames本人完整地提出的用微生物檢測致突變物的方法，是目前檢測基因突變最常用方法之一。ames法基本原理是鼠傷寒沙門氏桿菌的突變型(即組氨酸缺陷型)菌株在無組氨酸的培養基上不能正常生長，只有少數自發回變菌落生長。在有組氨酸的培基上可以正常生長，但在無組氨酸的培基中如有能引起該菌基因堿基置換或移碼突變的致突變劑存在，則突變型發生回復突變，回變為組氨酸非缺陷型野生型，即又可在無組氨酸培基上生長，使細菌生長增多。某些致突變劑需要激活后才能引起沙門氏菌突變型發生回復突變，由大鼠肝勻漿制備的哺乳動物體內肝微粒體多功能氧化酶s9混合液進行受試化學物質的代謝激活作用。測定致突然變異性物質所引起的復歸突然變異頻度，即可以檢查受試物是否為致突變物質。
根據ames試驗結果判定準則，當試驗受試物誘變的回復菌落數(x±s)增加，為自發對照的2倍或以上，并具有劑量效應或某一測試點可重復的統計學意義增加時為陽性，從六茶樣四菌株各水平實驗結果看，六個茶樣四菌株均顯陰性。因此可以得出結論為普洱茶及烘青綠茶對ta98、tal00、ta97及tal02四菌株不存在明顯的抑菌現象，不會誘導四菌株發生回復突變，三種類型普洱茶及烘青綠茶中沒有引起四菌株基因堿基置換或移碼突變的致突變劑存在。
chl染色體畸變試驗結果
用chl染色體畸變試驗評價f、e兩個普洱茶樣的致突變性本試驗結果表明，無論是24ｈ及48ｈ收獲細胞進行染色體畸變分析，空白對照、溶媒對照、s9混合液對照染色體畸變率在正常范圍，在s9活化和非活化兩種測試條件下，普洱茶e在試驗設計濃度范圍內染色體畸變率都在正常范圍，證明了普洱茶e、f在設計劑量條件下對chl細胞沒有致突變性。
1、普洱茶具有較高的飲用安全性
試驗結果表明：a、b、c、e、f五個代表性三種類型普洱茶的小白鼠灌胃ld50分別為9.7、11.2、12.2、11.8、12.4克/公斤體重。而烘青對照樣的ld50為7.5克/公斤，所測三種類型普洱茶的急性毒性都比烘青綠茶較小，且從毒理學的標準（who，1977）來看，六個茶樣都屬于實際無毒的范圍。六個普洱茶樣的ld50為推薦每人日飲茶量6g/d的100倍左右。因此從急性毒性角度來看，所測三種類型普洱茶的飲用安全性是很高的。從以上結果可以看出，正規廠家以及經過良好貯藏的普洱茶產品具有較高的飲用安全性。
2、普洱茶不會致突變和也沒有潛在致癌性
從以上經典遺傳毒性試驗結果來看，我們所試的五個普洱茶樣和烘青綠茶樣對原核細胞、真核細胞、生殖細胞都沒有致突變性。可以看出，正規廠家的普洱茶產品以及經過良好貯藏的普洱茶產品具有較高的飲用安全性，不會致癌！
3、試驗結果表明普洱茶具有一定的抗突變和抗癌的能力
所測試六個茶樣灌胃處理后，小白鼠骨髓微核發生率均略低于空白對照，提示所試茶樣均具有一定的降低微核自然發生率的功能，即所試普洱茶樣具有一定的抗突變和抗癌的作用！這與大量研究報道表明茶葉及其多酚類以及兒茶素類具有抗染色體損傷、抗突變和抗癌功能的報道是相一致的。（
正規廠家的普洱茶產品以及經過良好貯藏的，普洱茶產品具有較高的飲用安全性，不會致癌！
普洱茶作為我國傳統食品，已有較久的安全食用歷史，目前尚沒有相關的流行病毒性調查及食用毒害事例報告，從某種意義上講，食用普洱茶的正規主導產品是安全的。然而，近幾年來，普洱茶產業多次發生因衛生事件帶來的嚴重沖擊，例如：2001年普洱茶處于高速成長期，“金門、廣州、云南全線追蹤普洱茶”一文借題大肆攻擊普洱茶不安全的不實報道，使得2002年普洱茶市場嚴重萎縮，產品積壓，價格下跌，給普洱茶產業的發展帶來了巨大的破壞，2012年有關在“變質的濕倉普洱茶”中發現黃曲霉毒素的報道被一些人斷章取義，借此大肆詆毀普洱茶，“普洱茶致癌”的謠傳在網上傳得沸沸揚揚。
1、遺傳毒理學試驗----檢測是否潛在致癌的科學方法
流言傳于無知，止于智者！人類社會的發展和科學技術的進步，飲食消費中存在著大量的安全不確定因素需要明確！現代超微量分析技術的發展推進了化學成分檢出精度的不斷提高，不少曾被認為是“無污染”食品或“清潔”食品遠非那么純凈，而許多被宣布為有毒有害的化學物質實際上在環境中和食品中都被發現以極低數量廣泛存在，可以說不存在絕對安全的食物，如何科學客觀評價現代食品的安全性已變得越來越重要。
食品安全性評價是通過風險評估進行風險控制，利用足夠的毒理學資料確定物質的安全劑量，闡明某種食品是否可以安全食用，評估食品中有關危害成分或物質的毒性極其風險大小的過程。食品安全性評價在食品安全性研究、監控和管理上具有越來越重要的意義。安全性毒理學評價也是世界貿易組織（wto）的有關協定要求和食品法典委員會（cac）的有關準則對食品衛生安全研究的重要法定方法。它是相關食品標準制定的國際通行的重要依據。
遺傳毒性指環境中化學物和物理因素對生物體遺傳物質造成的損害。突變是細胞的遺傳物質發生改變所引起的一種生物學現象，致突變試驗目的是對受試動物是否具有潛在致癌作用進行篩選。致突變原可引發的生物體體細胞遺傳物質的突變，導致各種紊亂，其中最嚴重的后果是腫瘤或癌癥的發生，或者引發生物體生殖細胞(精子、卵子及它們的前體細胞)遺傳物質的突變，導致下一代遺傳性疾病發病率的升高。
遺傳毒性試驗是指對化學物改變細胞內遺傳物質的能力進行測試，確定其致突變性及其對生物的影響，對可遺傳損傷、致癌性以及其他有關損傷進行評價的方法。
本研究采用經典的遺傳毒理學試驗方法：小鼠骨髓微核率試驗、小鼠精子畸形分析試驗，鼠傷寒沙門氏桿菌回復突變試驗、倉鼠肺成纖維細胞(chl)染色體畸變試驗，以曬青毛茶為對照，對不同貯藏年份的共5種代表性普洱茶產品進行了遺傳毒性安全性毒理學評價，以檢測其是否具有潛在的致突變和致癌毒性。
材料與方法
1.1茶葉原料
為了研究普洱茶代表性產品的安全性，本研究選取了不同廠家，不同貯藏年份和不同包裝形式的五個普洱茶樣品作為研究對象，分別編號為：a、b、c、e、f，并選取了大葉種烘青綠茶作為對照。（如表）
1.2試驗動物
體重為18－22克昆明種(km)小白鼠。
1.3實驗菌株
鼠沙門氏傷寒桿菌突變株ta97、ta98、ta100、ta102。
1.4試驗細胞株
中國倉鼠肺纖維細胞(chl)株v79。
試驗方法：茶樣常規成分分析方法
茶葉水浸出物：全量法；茶多酚總量測定：酒石酸鐵比色法；咖啡堿含量：紫外分光光度法；茶葉水分含量的測定：恒重法。
除此之外，還用了小白鼠急性毒性試驗方法、小白鼠骨髓微核試驗方法、小白鼠精子畸形試驗方法、ames試驗方法、倉鼠肺成纖維細胞(chl)染色體畸變試驗。
結果與分析：茶樣常規成分分析結果(如表)
化學分析法是食品毒理學評價的重要手段，普洱茶生化成分的分析研究已有較多的報道，本試驗選檢以上幾個項目，以對所試茶樣的情況作簡要界定。檢測結果表明所選茶樣的常規成分具有較好的代表性。
各茶樣小白鼠(km)急性毒性試驗結果
各茶樣的半致死劑量(ld50)的計算,急性毒性試驗中ld50的計算有多種方法，本試驗采用bliss法統計軟件對各茶樣的急性毒性實驗結果進行統計分析，其結果如下：
六個茶樣的急性毒性統計結果分析(如表)
急性毒性試驗是指動物一日內單次或多次(在24小時內分2～3次給藥)給藥后，在7天或14天中，連續觀察動物所產生的毒性反應及死亡情況，從定性和定量兩方面進行觀察毒性反應的方法。從毒理學角度來看，任何物質都有毒性，人或動物攝入任何物質達到一定劑量都可能致死。文獻報道[171]，大鼠口服蒸餾水ld50為469±51mlkg-1，從表6可以看出，五個普洱茶樣品的ld50分別為：9.7g/kg、11.2g/kg、12.2g/kg、11.8g/kg、12.4g/kg，烘青綠茶樣的ld50為7.5g/kg，表明普洱茶樣的急性毒性比烘青綠茶樣還低，并發現六個樣品的一次灌胃量在5g/kg體重以下時喂養觀察十四天沒有動物死亡，低于1/2ld50的灌胃劑量灌胃后多數動物表現出神經興奮癥狀；隨著灌胃劑量加大，動物在十分鐘后出現神經抑制癥狀。五個普洱茶樣的急性致死時間只有一個高峰期，而烘青綠茶則有兩個死亡高峰期，分析認為普洱茶引起動物死亡以及由烘青綠茶引起的第一死亡高峰是由過高濃度的咖啡堿所致，而烘青綠茶樣d引起第二個動物死亡高峰則可能與過高濃度的茶多酚有關；根據who1977年頒布的毒性標準，六個茶樣的ld50均大于5000mg/kg體重，可判定為實際無毒。
六個茶樣的小白鼠骨髓微核試驗結果（如表）
普洱茶遺傳毒性——微核試驗結果
微核試驗是根據分裂間期細胞內殘留染色體斷片或整個染色體組成的一種圓形或橢圓形的小體，來判斷化學物質引起染色體異常作用的一種簡便的哺乳動物體內試驗。典型的微核呈圓形，直徑相當于紅細胞直徑的1/5～1/20，染色與核質相同。微核出現是一種染色體異常現象，微核檢出率增高，可反映染色體畸變情況。由于其測定方法較簡便、快速可靠，所以已作為化學致突變試驗中常用的一種篩檢方法。
表格上可以看出：經六個茶樣灌胃處理的昆明種小白鼠，試驗結果均為陰性。表明六個茶樣都不存在致染色體斷裂的致突變性，各茶樣處理的小白鼠骨髓微核發生率均略低于空白對照，提示所試茶樣均具有一定的降低微核自然發生率的功能，即所試普洱茶樣具有一定的抗突變和抗癌的作用！有大量研究報道表明茶葉及其多酚類以及兒茶素類具有抗染色體損傷的功能，也有人研究發現綠茶可以降低某些重金屬導致的微核率的增加。
普洱茶遺傳毒性--小白鼠精子畸形檢測試驗結果
精子畸形是指精子形狀的畸形和畸形精子數量增多，畸形精子增多的原因可能是由于在精子形成過程中，致突變源使精子形成有關的基因發生突變或某些特異染色體的重排。精子畸形試驗根據受試化學物如能影響實驗動物的精子成熟過程，則可觀察到精子頭部或尾部的形態變化。
精子畸形試驗是檢驗生殖細胞染色體毒性的一種手段，a、b、c、d、e、f六個茶樣按各自得1/2ld50、1/6ld50、1/20ld50各劑量處理后，其畸形精子率與陰性對照沒有顯著性差異，而陽性對照則比陰性對照有顯著性增加，因此判定六個茶樣各劑量的畸形精子檢測結果為陰性，四茶樣所試劑量對生殖細胞沒有致畸變作用。
ames試驗結果
鼠傷寒沙門氏菌營養缺陷型回復突變試驗通常簡稱ames試驗，它是1975年由ames本人完整地提出的用微生物檢測致突變物的方法，是目前檢測基因突變最常用方法之一。ames法基本原理是鼠傷寒沙門氏桿菌的突變型(即組氨酸缺陷型)菌株在無組氨酸的培養基上不能正常生長，只有少數自發回變菌落生長。在有組氨酸的培基上可以正常生長，但在無組氨酸的培基中如有能引起該菌基因堿基置換或移碼突變的致突變劑存在，則突變型發生回復突變，回變為組氨酸非缺陷型野生型，即又可在無組氨酸培基上生長，使細菌生長增多。某些致突變劑需要激活后才能引起沙門氏菌突變型發生回復突變，由大鼠肝勻漿制備的哺乳動物體內肝微粒體多功能氧化酶s9混合液進行受試化學物質的代謝激活作用。測定致突然變異性物質所引起的復歸突然變異頻度，即可以檢查受試物是否為致突變物質。
根據ames試驗結果判定準則，當試驗受試物誘變的回復菌落數(x±s)增加，為自發對照的2倍或以上，并具有劑量效應或某一測試點可重復的統計學意義增加時為陽性，從六茶樣四菌株各水平實驗結果看，六個茶樣四菌株均顯陰性。因此可以得出結論為普洱茶及烘青綠茶對ta98、tal00、ta97及tal02四菌株不存在明顯的抑菌現象，不會誘導四菌株發生回復突變，三種類型普洱茶及烘青綠茶中沒有引起四菌株基因堿基置換或移碼突變的致突變劑存在。
chl染色體畸變試驗結果
用chl染色體畸變試驗評價f、e兩個普洱茶樣的致突變性本試驗結果表明，無論是24ｈ及48ｈ收獲細胞進行染色體畸變分析，空白對照、溶媒對照、s9混合液對照染色體畸變率在正常范圍，在s9活化和非活化兩種測試條件下，普洱茶e在試驗設計濃度范圍內染色體畸變率都在正常范圍，證明了普洱茶e、f在設計劑量條件下對chl細胞沒有致突變性。
1、普洱茶具有較高的飲用安全性
試驗結果表明：a、b、c、e、f五個代表性三種類型普洱茶的小白鼠灌胃ld50分別為9.7、11.2、12.2、11.8、12.4克/公斤體重。而烘青對照樣的ld50為7.5克/公斤，所測三種類型普洱茶的急性毒性都比烘青綠茶較小，且從毒理學的標準（who，1977）來看，六個茶樣都屬于實際無毒的范圍。六個普洱茶樣的ld50為推薦每人日飲茶量6g/d的100倍左右。因此從急性毒性角度來看，所測三種類型普洱茶的飲用安全性是很高的。從以上結果可以看出，正規廠家以及經過良好貯藏的普洱茶產品具有較高的飲用安全性。
2、普洱茶不會致突變和也沒有潛在致癌性
從以上經典遺傳毒性試驗結果來看，我們所試的五個普洱茶樣和烘青綠茶樣對原核細胞、真核細胞、生殖細胞都沒有致突變性。可以看出，正規廠家的普洱茶產品以及經過良好貯藏的普洱茶產品具有較高的飲用安全性，不會致癌！
3、試驗結果表明普洱茶具有一定的抗突變和抗癌的能力
所測試六個茶樣灌胃處理后，小白鼠骨髓微核發生率均略低于空白對照，提示所試茶樣均具有一定的降低微核自然發生率的功能，即所試普洱茶樣具有一定的抗突變和抗癌的作用！這與大量研究報道表明茶葉及其多酚類以及兒茶素類具有抗染色體損傷、抗突變和抗癌功能的報道是相一致的。（