兒茶酚雙加氧酶基因大腸桿菌表達體系研究

從惡臭假單孢菌(pseudomonas sp．s-47)的dna中擴增得到924bp編碼兒茶酚雙加氧酶的基因片段，將其構建入pbluescriptsk載體bamhi和saci位點間。測序結果顯示與kim(2000)報道一致。將該基因插入帶慶大霉素抗性基因啟動子和tlt2終止子載體pg251、分別帶ompa和eap信號肽、lpp和gm′啟動子載體pyf395和pyf5254中，構建組成型表達載體pg251，分泌型表達載體pyfx1，pyfx2。酶活測定結果顯示pg251為665mu／ml，pyfx1，pyfx2分別為1815mu/ml，1015mu／ml。sds-page電泳顯示表達蛋白產物的分子量約為35kd。分泌型表達載體pyfx1表達量大于pyfx2，組成型表達載體pgx1由于使用弱啟動子表達量較低。完成機構：[1]上海市農業遺傳育種重點實驗室，上海201106 [2]上海市農業科學院農業生物技術研究中心，上海201106